（5）菌株接种浓度及培养基初始黄曲霉毒素B1浓度对降解效果的浑浊红球黄曲影响 菌株接种浓度及培养基初始AFB1浓度对降解效果的影响实验参考LinZhao等方法并作适当修改。取浑浊红球菌PD630菌种接种于NB培养基，菌P解特究震荡培养箱中（300C，对的生160r/min）活化36h后得到PD630菌株活化液，霉毒调整0D600控为1.5。物降菌液按照10%接种量接种于含AFB1的性研无菌培养基中，AFB1终浓度为0.4μg/mL。浑浊红球黄曲无菌NB培养基代替PD630菌液作为空白对照。菌P解特究分别在培养0、对的生12、霉毒24、物降36、性研48、浑浊红球黄曲60和72h后提取样品中的菌P解特究AFB1，HPLC测定培养基中AFB1残余浓度，对的生分别接种1%、5%、10%、15%菌液于含AFB1的无菌NB培养基中，使AFB1终浓度为0.4μg/mL，无菌NB培养基作为空白对照。调整NB培养基中的AFB1使终浓度分别为0.25、0.5、1.0、2.0ug/mL，按10%接种量加入菌株活化液，以AFB1终浓度相同的无菌NB培养基作为空白对照。震荡培养箱培养（300C，160r/min），分别于0、12、24、36、48、60和72h取样，提取培养液中残留的AFB1进行HPLC分析。 （6）无细胞上清、菌细胞悬液、胞内裂解物对黄曲霉毒素B1的降解活性 PD630菌株在300C，160r/min条件下培养72h，菌株发酵液通过在40C，8000r/min离心20min收集上清及细胞沉淀物：（a）上清液通过0.22μm无菌滤膜过滤后用于进一步实验；（b）菌体细胞沉淀用无菌生理盐水洗涤3次后再次用生，理盐水重悬，制备得到菌细胞悬液；（c）取部分菌悬液通过细胞超声破碎仪破碎后，细胞内容物在8000r/min，40C离心20min，0.22μm滤膜过滤得到胞内裂解液；（d）取部分发酵液不作任何处理；（e）灭菌备用的NB培养基。 在上述所制备的5种处理液中分别加入AFB1，终浓度为0.4μg/mL。将培养体系置于300C，180r/min黑暗温育72h后，提取AFB1进行HPLC分析。 （7）PD630菌株无细胞上清对黄曲霉毒素B1的降解效果，按PD630菌株在300C，160r/min条件下培养72h，菌株发酵液通过在40C，8000r/min离心20min收集上清及细胞沉淀物：（a）上清液通过0.22μm无菌滤膜过滤后用于进一步实验；（b）菌体细胞沉淀用无菌生理盐水洗涤3次后再次用生，理盐水重悬，制备得到菌细胞悬液；（c）取部分菌悬液通过细胞超声破碎仪破碎后，细胞内容物在8000r/min，40C离心20min，0.22μm滤膜过滤得到胞内裂解液；（d）取部分发酵液不作任何处理；（e）灭菌备用的NB培养基。在上述所制备的5种处理液中分别加入AFB1，终浓度为0.4μg/mL。将培养体系置于300C，180r/min黑暗温育72h后，提取AFB1进行HPLC分析。加入AFB1使终浓度为0.4μg/mL，在300C，180r/min的黑暗条件下培育，分别在0、12、24、36、48、60、72h取样分析AFB1残留量。AFB1终浓度相同的无菌NB培养基作为空白对照。 （8）加热、EDTA、蛋白酶K对无细胞上清降解黄曲霉毒素B1活性的影响 根据XiulanSun等方法进行研究。为了探究无细胞上清中的活性成分性质，分别沸水浴处理20min；1210C高压灭菌锅处理10min；0.1MEDTA处理lh；1mg/mL蛋白酶K在550C下处理lh。处理结束后在各处理上清液中加入AFB1，令AFB1终浓度为0.4ug/mL，在300C，180r/min的培养条件下黑暗温育72h。AFB1终浓度相同的无菌NB培养基作为空白对照，温育结束后提取AFB1进行HPLC分析。 4、数据处理 采用Originpro2018和SPSS23.0对本文数据进行处理和分析，每组重复3次。 二、结果与讨论 1、黄曲霉毒素B1的提取及测定，通过： ①高效液相色谱法色谱条件 色谱柱：WatersC18柱（5μm，4.6x150mm）；流动相为乙腈：水=40：60（v/v）；流速：1.0mL/min；柱温：300C；进样量20uL；检测器：紫外检测器；检测波长365nm。 ②黄曲霉毒素B1标准曲线的制作及样品的处理标准 曲线的制作：将lmgAFB1标准品溶解于25mL色谱级甲醇中，得到40μug/mL标准储备液，保存于-200C冰箱中。将该储备液用色谱级甲醇精密稀释，获得0.5、1、2、4、8μg/mL的标准曲线工作溶液。色谱柱：WatersC18柱（5μm，4.6x150mm）；流动相为乙腈：水=40：60（v/v）；流速：1.0mL/min；柱温：300C；进样量20uL；检测器：紫外检测器；检测波长365nm。按色谱条件进行HPLC分析，以溶液浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制AFB1标准曲线，计算得到回归方程为：y=74752x—4894.6，R2=0.9998的实验所述的高效液相色谱法测定得到黄曲霉毒素B1色谱图。
由图1可知，该高效液相色谱法对AFB1有良好的分离测定效果，AFB1在紫外波长为365nm的条件下出峰良好，峰形符合液相要求，出峰时间为3.8土0.5min。 2、添加标准品分析黄曲霉毒素B1提取测定方法回收率及精密度 依据方法学对黄曲霉毒素B1的提取测定方法进行了评估，以保证AFB1结果测定的可靠性。 AFBI分析方法的回收率及精密度如表1所示。
声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系 相关链接：黄曲霉毒素b1，蛋白酶，甲醇 |
基本面悲观 玻璃期价四季度料维持跌势,行业资讯酸性电解水结合复合膜对橘柚保鲜效果的研究（二）“铁拳”行动 ｜福建莆田3家企业“一品一码”未录入登记被警告怀孕天数计算公式,如何准确计算怀孕周期河北邯郸：持续推进农村食品安全治理胎儿胎教音乐（如何选择适合胎儿听的音乐）中国食药促进会消毒专业委员会组织的七项团体标准技术审查会顺利召开波兰制订膳食补充剂中硒和钼的每日最大摄入限量重庆、成都市场监管部门联手助推成渝地区双城经济圈建设河北省市场监管局提示：洪涝灾害后要谨慎使用电梯等特种设备原油交易提醒：OPEC+成员国抗拒更快增产，机构看向120美元佳兆业前十月合约销售额同比增23%至957.4亿被打服了？KD盛赞库里：MVP和名人堂级别关于极氪的大胆猜想 造车新势力第二次浪潮兴起欧冠单场：阿贾克斯4：0大胜多特蒙德北京发布大雾黄色预警 部分地区能见度小于500米人工智能“热科技”落地还面临不少挑战今日视点：上市公司判断退市风险不能仅靠“我认为”合生创展回应收购奥园健康及雅生活传闻:消息不属实美菜发挥平台与供应链优势，为生鲜行业难题提供解决新思路11月2日外汇交易提醒：美元下跌瑞郎大涨，关注澳洲联储决议王彦霖自曝上学时收情书收到手软 大学旧照曝光后 帅到想嫁什么老酒比较好 唐庄酒一品见分晓锦艺置业深耕地产，打造品质地产商四人得分20+希罗贡献25分 热火客场轻取独行侠合理吗？16倍高溢价收购控股子公司少数股权，英威腾收关注函东方园林持续深耕生态建设领域，助力“双碳”愿景早日实现“更可靠”风光电力系统呼唤储能设备升级 二氧化碳零排放目标前进一大步冠县电商企业畅享“专窗”服务11月3日外汇交易提醒：美元走强澳元大跌，关注美联储利率决议热炒“元宇宙”概念股不可取被骂三年，还是一点没改？API库存大增360万桶，美油跌逾1%失守83关口国际油价延续反弹，OPEC增产不力，需求端则有发力迹象苏州天丰泰—— 好车有礼 任君挑选拼直邮Group具体表现如何呢，想给家里的宠物囤点必需品冬奥火炬与一根红线的故事搭载全场景智控四驱系统 瑞虎8 PLUS鲲鹏版官图曝光子公司为元宇宙的完美缔造者？大富科技20CM涨停后收关注函MVP对决一节就被打花 杜兰特会想念库里吗？
